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細(xì)菌冷凍干燥機(jī)操作

點(diǎn)擊次數(shù):1769    更新時(shí)間:2017-04-28

    細(xì)菌冷凍干燥機(jī)顧名思義是一種用于細(xì)菌、菌種、微生物等凍干保存的真空冷凍干燥機(jī),也常常被稱為細(xì)菌凍干機(jī)、菌種冷凍干燥機(jī)、微生物冷凍干燥機(jī)。其操作步驟如下:

一、菌株準(zhǔn)備及分裝

    液體培養(yǎng)的菌種,經(jīng)離心收集和用生理鹽水洗滌細(xì)胞,收集的菌體用保護(hù)劑(10ml脫脂牛奶中加1g米孢子粒)懸浮制成菌懸浮液。懸液中菌數(shù)要求達(dá)到108-1010個(gè)/ml為宜。懸液制備完成盡快分裝和凍結(jié)。分裝安瓿時(shí)可用滅菌長嘴毛吸管或長針注射器,每管分裝量約0.1-0.2ml(0.3-0.5ml,單管式冷凍管球形裝液區(qū)內(nèi)的裝液量應(yīng)為球體積的一半左右),分裝安瓿管時(shí)間盡量要短,在1-2小時(shí)內(nèi)分裝完畢并且預(yù)凍,分裝時(shí)應(yīng)注意在無菌條件下操作。

二、預(yù)凍

    置于-80℃超低溫冰箱預(yù)凍1-2小時(shí)(也可直接選購-80℃低溫實(shí)驗(yàn)室冷凍干燥機(jī))。

三、 冷凍干燥

1. 將冷凍后的樣品安瓿管置于細(xì)菌冷凍干燥機(jī)上(先開機(jī)預(yù)冷30分鐘以上才開泵),開始冷凍干燥,時(shí)間一般為數(shù)小時(shí)。終止干燥時(shí)間應(yīng)該根據(jù)以下情況判斷:安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或者松散狀;真空度接近空載時(shí)的zui高值;選用1-2支對(duì)照管,其水份與菌懸液同量,視為干燥完結(jié)。(注意:確認(rèn)干燥后,要先開啟冷凍室的進(jìn)氣閥,讓真空釋放,然后停泵,打開冷凍室,將冷凍干燥管取出。)

2. 真空封口

將安瓿管頸部棉塞以下處用強(qiáng)火焰拉細(xì)進(jìn)行熔封。

四、 保藏

   安瓿管保藏在-20℃超低溫冰箱中。

五、 活化

    如果要從中取出菌種恢復(fù)培養(yǎng),可先用75%酒精將管得外壁消毒,用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現(xiàn)裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端,,在安瓿管中加入0.5-1ml液體培養(yǎng)基,慢慢旋轉(zhuǎn)安瓿管,使凍干菌種復(fù)蘇,然后直接接種到瓊脂斜面或涂布平板。

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